Совет месяца: Более точные ПЦР в реальном времени с белыми ПЦР-пробирками
Улучшенная воспроизводимость - оптимизированная чувствительность – снижение взаимных помех
В анализах на основе измерения флуоресценции, таких как ПЦР в реальном времени (qPCR), при использовании небольших объёмов особенно актуальны преимущества улучшенных отражательных свойств белых расходных материалов для ПЦР. Тем не менее, в настоящее время при проведении qPCR чаще применяются прозрачные материалы. Узнайте здесь, как можно легко улучшить результаты qPCR.
Как использование белых ПЦР-пробирок влияет на воспроизводимость?
Благодаря максимальному отражению белых пробирок флуоресцентный свет «не теряется» в стенках лунок и, соответственно, количество флуоресцентного света, достигающего детектор, более постоянно, чем при использовании прозрачных изделий. В результате достигается снижение рассеяния при обнаружении вторых и третьих экземпляров и при повторе экспериментов. Прозрачный и
Как можно добиться улучшенного соотношения сигнал / фон?
Ввиду в несколько раз более высокого уровня флуоресценции белых расходных материалов для ПЦР и неизменных фоновых эффектов из-за используемого люминофора достигается улучшенное соотношение сигнал / фон в белых пробирках.
Можно ли избежать взаимных помех («crosstalk») между отдельными лунками?
При использовании прозрачных лунок может происходить детектирование флуоресценции от соседних лунок из-за рассеяния флуоресцентного света. Благодаря полной светонепроницаемости белых расходных материалов детекторы флуоресценции в термоциклере не могут обнаруживать сигналы флуоресценции от соседних лунок.
Как использование белых ПЦР-пробирок влияет на чувствительность ПЦР?
На этом вопросе мы хотели бы остановиться подробно, на примере сравнительного эксперимента qPCR. Показанный на рис. 1 результат опыта иллюстрирует, что измеренная интенсивность флуоресценции при равных количествах матрицы в белых пробирках значительно выше, чем в прозрачных. Для прозрачных и для белых ПЦР-стрипов на рис. 1 пороговое значение автоматически рассчитывалось в термоциклере независимо друг от друга. Для обнаружения 1000 молекул матрицы в прозрачных пробирках было рассчитано среднее значение Cq = 24,87 ± 0,08 (n = 8), а для белых пробирок - значение Cq = 23,40 ± 0,07. Это значит, что в белых пробирках обнаружение происходит раньше. Это является особенным преимуществом, когда в наличии есть лишь небольшие объёмы проб. Таким образом, благодаря использованию белых расходных материалов возможно успешное обнаружение молекул в тех случаях, когда с прозрачными материалами проведение ПЦР нецелесообразно.
Сравнение уровня флуоресценции в белых и прозрачных лунках
В чём заключается экономический аспект уменьшения объёма при проведении опытов?
Так как с белыми расходными материалами для ПЦР достигается гораздо более высокий уровень флуоресценции, становится возможным значительное сокращение объёма проб и тем самым количества используемых реагентов (ферментов, зондов, праймеров и др.). Тем самым возможна экономия расходов на реагенты.
Вывод:
применение белых расходных материалов для ПЦР несёт существенные преимущества, которые не следует игнорировать. Не компрометируйте свои результаты только для того, чтобы иметь возможность визуального контроля лунок сбоку или снизу!
